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i型胶原抗体orb27305 pubmed  24391884 plos one

条带中间出现白斑点

1. 原因：底物消耗过快，中间区底物消耗完不发光了；

2. 优化：降低蛋白量，降低一抗和二抗的浓度；

3. 解析：快速操作，在中间部位底物消耗之前就把胶光片定影出来，一般实验员很难把控制；首0选从降低蛋白量，降低一抗二抗浓度入手。

出现黑点

1. 原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特---结合；

2. 优化：封闭用的牛奶一定要纯并且完全溶解，封闭后至少洗膜一次；

3. 解析：确定封闭牛奶完全溶解，否则封闭时会导致不溶性颗粒附着在膜上，在发光时膜上会出现黑点；建议在牛奶溶解之后静止三分钟，轻取上层牛奶液进行封闭，封闭结束常规洗膜一次；孵育一抗或二抗时，需要加牛奶的也请参照此操作。